Diana s-a născut în familia Spencer. În partea mamei, Diana avea strămoși de origine englezi, irlandezi, scoțieni, americani și armeni. Una dintre străbunicile ei, în partea mamei, era moștenitoarea Frances Work din New York. Ea era și descendenta Ducilor de Devonshire. În partea tatălui său, era descendentă a Regelui Carol al II-lea al Angliei prin patru fii ilegitimi:
Cei din familia Spencer au fost apropiați familiei regale britanice de secole, fiind favorizați mai ales din anii 1600. Bunica Dianei din partea mamei, Ruth Burke Roche, Baroană Fermoy|Ruth, Lady Fermoy, a fost o prietenă pe viață și doamnă de companie pentru Elisabeta Bowes-Lyon|Regina Elisabeta, Regina Mamă. Tatăl ei a fost ofițer al palatului în timpul Regelui George al VI -lea și a Reginei Elisabeta a II -a.
În august 2007, Societatea Istorică Genealogică din Noua Anglie a publicat cartea lui Richard K. Evans "Strămoșii Dianei, Prințesă de Wales, timp de doisprezece generații".
- Henry Fitzroy, I-ul Duce de Grafton, fiul d-nei Barbara Palmer, Ducesă de Cleveland
- Charles Lennox, I-ul Duce de Richmond și Lennox, fiul d-nei Louise de Kérouaille
- Charles Beauclerk, I-ul Duce de St Albans|Charles Beauclerk, fiul lui Nell Gwyn
- James Scott, I-ul Duce de Monmouth|James Crofts- Scott, I -ul Duce de Monmouth, conducător al unei cunoscute mișcări de protest, fiul lui Lucy Walter
- Iacob al II-lea al Angliei = Arabella Churchill (metresă regală)
- Henrietta FitzJames (fiica lui Iacob al II-lea) = Henry Waldegrave, Baron Waldegrave
- James Waldegrave, Conte Waldegrave = Mary Webb
- James Waldegrave, al II-lea Conte Waldegrave = Maria Walpole
- Lady Anna Horatia Waldegrave = Lord Hugh Seymour
- Colonel Sir Horace Beauchamp Seymour = Elizabeth Malet Palk
- Adelaide Horatia Elizabeth Seymour = Vice-Admiral Sir Frederick Spencer, al IV -lea Conte Spencer
- Charles Robert Spencer, al VI -lea Conte Spencer = Hon. Margaret Baring
- Albert Edward John Spencer, al VII -lea Conte Spencer = Lady Cynthia Elinor Beatrix Hamilton
- John Spencer, al VIII -lea Conte Spencer = Onorabila Frances Ruth Burke Roche
Cei din familia Spencer au fost apropiați familiei regale britanice de secole, fiind favorizați mai ales din anii 1600. Bunica Dianei din partea mamei, Ruth Burke Roche, Baroană Fermoy|Ruth, Lady Fermoy, a fost o prietenă pe viață și doamnă de companie pentru Elisabeta Bowes-Lyon|Regina Elisabeta, Regina Mamă. Tatăl ei a fost ofițer al palatului în timpul Regelui George al VI -lea și a Reginei Elisabeta a II -a.
În august 2007, Societatea Istorică Genealogică din Noua Anglie a publicat cartea lui Richard K. Evans "Strămoșii Dianei, Prințesă de Wales, timp de doisprezece generații".